引物设计网页版（引物设计的软件哪个比较好）

本文目录一览：

• 1、primer3.0在线设计引物-如何在Windows7系统中使用PrimerExpress3.0_百...
• 2、primer5设计引物怎么修改tm
• 3、如何设计引物
• 4、如何设计pcr引物
• 5、如何设计primer-如何如何使用primerprimer设计引物

primer3.0在线设计引物-如何在Windows7系统中使用PrimerExpress3.0_百...

1、通过已有文献确认所需扩增序列的名字。从网上寻找该基因的全序列并存档，请确认序列引用页上“mRNA”标识。复制序列，将之粘贴至在线软件“Primer3”或“Primer5”上，设定参数，设计引物并存档。

2、首先得下载安装一个primer5的软件，网上百度搜索后即可下载获得 点击File下拉菜单，选择New，然后选择DNASequence 从word文件中copy目标序列，然后control+V到primer5的文本框中，选择Asis，点击OK。

3、进入软件，genetank窗口file---new---DNAsequence进入序列输入版块。然后control+v输入序列，如不改变序列，选择AS菜单。然后进入primer引物设计。进入search，点OK。系统自动生成引物。选你需要的就可以了。（有评分）。

4、之前NCBI上有一个probe选项可以直接设计引物，上面会给出上下游序列。

primer5设计引物怎么修改tm

点击File下拉菜单，选择New，然后选择DNASequence 从word文件中copy目标序列，然后control+V到primer5的文本框中，选择Asis，点击OK。

笔者在使用过程中发现一个严重的缺点，lasegene不能对引物进行编辑和修改，在这一点上Primer premier就做得好多了。软件各有所长，使用哪个软件完全取决于自己的习惯和爱好。

将退火温度设定为比最低的Tm低5℃ 或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。

下载的0版注册一下就能用了，应该有中文说明设计引物的方法，看说明学习一下就可以了。

如何设计引物

避免二聚体和自身互补：设计引物时需要避免两个引物之间形成二聚体或自身互补，这会影响PCR效率和特异性。 进行特异性检测：使用软件工具进行特异性检测，以确保所选引物只扩增目标DNA序列而不扩增其他非特异性DNA。

特异性：引物最好在模板cDNA的保守区内设计。引物应与核酸序列数据库的其他序列无明显同源性，不应有连续8个碱基与待扩增区外序列完全互补。可对其进行BLAST检测进行验证。

引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应。

引物最好在模板cDNA的保守区内设计。引物长度一般在15-30碱基之间。引物GC含量在40%-60%之间，Tm值最好接近72℃。引物3′端要避开密码子的第3位。引物3′端不能选择A，最好选择T。

引物之间的TM相差避免超过2℃ 引物的3’端避免使用 碱基 A，引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基 为避免的扩增，引物设计最好能跨两个 外显子 。

首先需要确定要扩增的目标基因或DNA序列。这通常是对益生菌进行分类、鉴定或检测所需要的特定基因或DNA片段。根据目标基因的序列，设计一对特异性引物。引物是PCR反应中用来引导DNA合成的短序列，通常为15-30个核苷酸。

如何设计pcr引物

1、【科研】PCR引物设计原则引物自身及引物之间不应存在互补序列。引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′端△G值较低。引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。扩增产物的单链不能形成二级结构。1引物应具有特异性。

2、引物之间：两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避免3’端的互补重叠。

3、PCR引物设计的11条黄金法则 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。

4、引物5撇端可以修饰。引物3撇端不可修饰。引物3撇端要避开密码子的第3位。引物设计需要注意的地方很多，在大多数情况下，我们都是在知道已知模板序列时进行PCR扩增的。

5、PCR引物设计的11条黄金法则引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。遵循原则如下：引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。

如何设计primer-如何如何使用primerprimer设计引物

1、选择上方的红蓝双向箭头的按钮进行引物设计，在设计开始前可以更改设计的参数，包括搜索的碱基范围、引物的长度，碱基数，设计结果显示的引物对数等。设置完参数后，点击下方的Search，软件开始分析设计，完成后，点击OK。

2、首先得下载安装一个primer5 的软件，网上百度搜索后即可下载获得 点击File下拉菜单，选择New，然后选择DNA Sequence 从word文件中copy目标序列，然后control+V到primer5的文本框中，选择As is，点击OK。

3、先下载好primer premier0软件，按注册机提示激活该软件，然后双击打开该软件。如下图示 然后进入NCBI数据库里面选择自己需要设计引物的基因，然后查找到该基因的DNA序列。

4、你设计的引物是否有用？在做实验之前可以做一个电子PCR qPCR引物设计+在线验证 方法一：NCBI上-probe 之前NCBI上有一个probe选项可以直接设计引物，上面会给出上下游序列。

5、设定Sense primer和Antisense primer的范围及PCR产物大小范围——设定引物长度（primer length）——Automatic——OK——Search complete后点OK——在Search Results里选择引物对。